恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性

将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。     

卵黄和低密度脂蛋白对冷冻保存绵羊精子胆固醇、磷脂含量的影响

为了探索绵羊冷冻精液受精率低的原因,在稀释液中用低密度脂蛋白代替卵黄冷冻绵羊精液,研究LDL对冷冻中精子脂类含量的影响。结果表明,以卵黄稀释液冷冻精液,精子胆固醇含量从鲜精的234．54nmol／10^9降低到163．76nmol／10^9精子,胆固醇与磷脂的比值（c／p）从0．54下降到0．36;以9g／100mL LDL代替卵黄,冷冻后胆固醇含量为243．73nmol／10^9精子,c／p值保持在0．50。研究得出在卵黄稀释液中冷冻绵羊精液,精子胆固醇流失,c／p值下降;以LDL代替卵黄,可有效保护精子胆固醇,避免流失,维持了精子c／p值。     

抗阿莫西林多克隆抗体的制备

[目的]为研究阿莫西林残留的免疫学检测方法奠定基础。[方法]采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将阿莫西林分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原AMX-BSA和检测抗原AMX-OVA,用AMX-BSA免疫成年兔以获得高效价的多克隆抗体。[结果]免疫抗原AMX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特征,其最大吸收峰在276 nm处,说明载体蛋白BSA与AMX成功偶联,可用于动物免疫。检测抗原AMX-OVA最大吸收峰在275 nm处,说明载体蛋白OVA与AMX成功偶联,可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明,2只兔抗血清效价较高,均达1∶32 000以上,说明有特异性抗体产生。[结论]该研究成功制备了抗阿莫西林多克隆抗体,也进一步证明药物偶联成功。     

犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

[目的]获得犬瘟热病毒F蛋白特异性单克隆抗体。[方法]用纯化的大肠杆菌BL21表达的犬瘟热病毒重组F蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用传统的杂交瘤技术制备单克隆抗体。用ELISAI、FA、Western-blot、细胞中和试验鉴定各株单抗的生物学特性。[结果]获得7株稳定分泌犬瘟热F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2D6,3E10,3A2,5B7,5F6,6H8,9B6);单抗亚类鉴定结果分别为IgG2a,IgG1,IgG2b,IgG1,IgG1,IgG2a和IgG1;细胞中和试验初步证实2株单抗(5B7,9B6)具有中和犬瘟热病毒感染Vero细胞的作用,中和效价分别为1∶320和1∶640;经ELISA相加试验证实7株单抗的作用位点不同,其中2D6,5F6的作用位点非常相近。[结论]该研究成功制备了7株抗犬瘟热F蛋白特异性单抗,为进一步研究犬瘟热病毒F蛋白和临床诊断打下良好的基础。     

新疆成年绵羊对口蹄疫Asia-Ⅰ型与O型二价灭活疫苗免疫效果观察

与牛和猪的口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)相比,绵羊FMD通常不表现出明显的临床症状,但其在FMD流行病学中的传播作用不可低估.本研究选择有免疫接种史的成年绵羊来验证3种FMD二价灭活疫苗的免疫效果,并进行跟踪免疫监测.实验结果表明,3种疫苗免疫绵羊30 d后,所有被检绵羊的血清O型和Asia-Ⅰ型ELISA抗体滴度≥lg2.19,在此后的不同检测时间段分别达到峰值,随后下降,免疫150 d时,被检绵羊的O型和Asia-Ⅰ型ELISA抗体滴度仍维持在lg1.86～lg2.20.实验结束时,3种疫苗的O型ELISA抗体合格率≥70%,Asia-Ⅰ型ELISA抗体的合格率≥80%,均达到了国家标准.这些结果提示,在我国FMD防控计划中,对有免疫接种史的成年绵羊每年2次接种二价灭活FMD疫苗是可行的.     

弧目大蚕蛾卵块空间分布型及其应用研究

用6种聚集度指标对弧目大蚕蛾卵的空间分布状况进行调查与分析,结果表明：（1）该虫卵的空间分布符合负二项分布,其空间图式是聚集的,分布的基本成分是卵块的个体群;（2）最适抽样数N与平均卵密度m及允许误差D的关系为N=（I／O）。[（6．6814／m）＋0．9758]。     

饥饿与再投喂对褶皱臂尾轮虫几种消化酶活力的影响

25℃下就饥饿与再投喂对褶皱臂尾轮虫几种消化酶活力的影响进行了研究。结果表明：整个试验过程淀粉酶和纤维素酶活力一直保持较高水平。饥饿条件下,淀粉酶和纤维素酶活力在最初的1～2d下降最为明显,此后保持在一定水平;类胰蛋白酶和胃蛋白酶活力总体下降不大。饥饿条件下带卵率<0.09时,轮虫消化酶活力显著低于正常水平。恢复投喂1d后,褶皱臂尾轮虫带卵率从0增加到0.21,类胰蛋白酶和纤维素酶活力恢复正常水平,而胃蛋白酶和淀粉酶活力高于正常水平;活体观察显示褶皱臂尾轮虫胃和胃腺在再投喂1d内恢复正常结构。投喂条件下,这几种消化酶活力的高低与与带卵率大小没有直接关系。     

左旋咪唑影响流感灭活疫苗（H9N2）抗体滴度

为了研究不同剂量的左旋咪唑对鸡流感病疫苗免疫效果的影响,将20只17龄雏鸡,随机分成A、B、C、D四组,每组5只。分别皮下注射H9N2灭活疫苗0.5ml/羽,同时给试验组A(0.6mg)、B(0.3mg)、C(0.15mg)剂量的左旋咪唑,D组不加。免疫后0d、7d、14d、21d和28d,翅下静脉采血检测抗H9N2亚型禽流感病毒抗体滴度。结果表明,给药组的抗体水平都明显高于对照组;不同给药剂量的组别的抗体水平也存在差别,高、中剂量A、B组抗体水平基本一致,却明显低于低剂量组D。这表明左旋咪唑影响H9N2流感病毒疫苗抗体滴度,低剂量(0.15mg)添加左旋咪唑,可提高疫苗的抗体水平。     

青海地区丝状支原体山羊亚种的流行病学调查

为了解丝状支原体山羊亚种在青海地区的流行状况,利用丝状支原体山羊亚种抗体检测正向间接血凝试剂盒对2007～2009年采自青海各地区的1 200份山羊血清进行检测。结果显示:不同地区山羊血清的阳性率从5.0%～21.0%不等,平均阳性率为16.1%。从季节上看,冬春季节发病率要高于夏秋季节。青海地区的丝状支原体山羊亚种的感染率偏高,应该加强对由丝状支原体山羊亚种的防控。     

Cryopreservation of Queen Honeybee （Apis mellifera carnica） Born Worker Eggs by Vitrification

Many species of insect egg can be targeted individually or （and） collectively for cryopreservation by vitrification. However, there has been no report on cryopreservation of honeybee eggs by vitrification. In an attempt to define a preliminary procedure of cryopreservation of honeybee eggs by vitrification, queen honeybee born worker eggs （worker eggs） were stored through vitrification in liquid nitrogen up to 1 h, and then post-vitrification survival of the vitrified worker eggs in vitro and their hatching rates during maturation in vivo were observed using microscopic and close visual inspections. The procedure of cryopreservation by vitrification included dechorionation with sodium hypochlorite and permeabilization with isopropyl alcohol; equilibration by addition of loading solution （i.e., 25% vitrification storage solution） and dehydration by gradual replacement of loading solution with vitrification storage solution; cooling in liquid nitrogen vapor right before droplet vitrification in liquid nitrogen; and recovery in liquid nitrogen vapor right after storage in liquid nitrogen, thawing at temperature of thawing medium （5% sucrose in TC 100-insect medium） and rehydration by gradual replacement of vitrification storage solution with rehydration solution （5% fetal bovine serum in TC 100-insect medium）. It was found that among the worker eggs experiencing cyropreservation by vitrification, 1.25% of them were successfully passed through the four life stages, viz., egg, larva, pupa, and adult. In summary, it can be inferred that although a majority of worker eggs were dead after cyropreservation by vitrification, a few of them were developed into larvae, pupae, and finally emerged as adults.